Mestrado Universitario en Asistencia e Investigación Sanitaria (plan 2012) |
Asignaturas |
Técnicas de Manipulación y Análisis de Ácidos Nucleicos |
Contenidos |
Datos Identificativos | 2019/20 | |||||||||||||
Asignatura | Técnicas de Manipulación y Análisis de Ácidos Nucleicos | Código | 653862227 | |||||||||||
Titulación |
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Descriptores | Ciclo | Periodo | Curso | Tipo | Créditos | |||||||||
Máster Oficial | 2º cuatrimestre |
Primero | Obligatoria | 6 | ||||||||||
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Tema | Subtema |
Tema 1. Los ácidos nucleicos. | 1.1. Estructura de los ácidos nucleicos. 1.2. Función de los ácidos nucleicos. 1.3. Aislamiento de los ácidos nucleicos. 1.4. Cuantificación de los ácidos nucleicos. |
Tema 2. La Reacción en Cadea de la Polimerasa (PCR). | 2.1. Variantes del método de la PCR. 2.2 PCR cuantitativa o en tiempo real (qPCR): cuantificación absoluta y relativa. 2.3. Aplicaciones de la PCR en la investigación médica. |
Tema 3. La variabilidad genética. | 3.1. Técnicas del análisis de la variabilidad genética: PCR y secuenciación del ADN. 3.2. Variabilidad genética del ADN mitocondrial. |
Tema 4. Herramientas bioinformáticas para el análisis de secuencias de ácidos nucleicos. |
4.1. Para el análisis de secuencias codificantes y no codificantes. 4.2. Para la búsqueda de polimorfismos y variabilidad en estudios poblacionales. 4.3. Para el análisis de secuencias repetitivas y su implicación en diversas patologías. |
Tema 5. Técnicas de inmunoprecipitación de la cromatina (ChIP). |
5.1. Para la detección de proteínas unidas a secuencias de ADN (ADN-ChIP) 5.2. Para la detección de proteínas unidas a secuencias de ARN (ARN-ChIP) |
Tema 6. Introducción a la citogenética molecular. | 6.1. Hibridación in-situ fluorescente (FISH). 6.2. Aplicaciones de la citogenética en la investigación: DNA Breakage Detection- FISH (DBD-FISH) y COFISH. |
Tema 7. Metodología de la mutagénesis aleatoria y dirigida del ADN. |
7.1. Aplicaciones prácticas de la mutagénesis aleatoria en el laboratorio de investigación. |
Tema 8. Ingeniería genética. | 8.1. La tecnología del ADN recombinante. 8.2. Métodos de entrega de ADN: transfección y transducción. 8.3. Investigación en animales transgénicos. 8.4. Geración de animales “knockout”. |
PRÁCTICAS. 1.- Aislamiento del ARN a partir de un cultivo celular. 2.- Desarrollo de una RT-PCR 3.- Desarrollo de una PCR a tiempo real. 4.- Secuenciación de ADN. 5.- Software de análisis. 6.- Co-immunoprecipitacion. 7.- Estudio citogenético. 8.- Mutaxénese. 9.- Transfección. 10.- Observación de resultados. |
PRÁCTICAS (DESARROLLO): 1.- Aislamiento del ARN a partir de un cultivo celular. Cuantificación y análisis del ARN aislado mediante bioanalizador. 2.- Desarrollo de una RT-PCR: preparación de las reacciones y programación del termociclador. Análisis del ADNc obtenido tras la RT-PCR. 3.- Desarrollo de una PCR en tiempo real: preparación de las reacciones y programación del termociclador. Interpretación de los resultados obtenidos. 4.- Secuenciación de ADN. Visualización y funcionamiento de un secuenciador automático de ADN. 5.- Software de análisis. Empleo de diferentes softwares para el análisis de secuencias de ácidos nucleicos. 6.- Co-immunoprecipitacion e identificación de los complejos proteicos que interaccionan con una determinada proteína. 7.- Estudio citogenético. Preparación de muestras para estudio citogenético (cariotipo y FISH). Clasificación de cromosomas en el cariotipo e identificación de anomalías cromosómicas mediante FISH. 8.- Mutagénes. Mutagénese dirigida de dominios o residuos aminoacídicos en genes de interés clínico. Estudios fenotípicos de la selección de mutantes. 9.- Transfección de plásmidos en células eucariotas o procariotas y estudio de las células transfectadas. 10.- Observación de resultados. Observación al microscopio de líneas de empaquetamiento. |
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