Datos Identificativos 2019/20
Asignatura (*) Técnicas de Manipulación y Análisis de Ácidos Nucleicos Código 653862227
Titulación
Mestrado Universitario en Asistencia e Investigación Sanitaria (plan 2012)
Descriptores Ciclo Periodo Curso Tipo Créditos
Máster Oficial 2º cuatrimestre
Primero Obligatoria 6
Idioma
Castellano
Gallego
Inglés
Modalidad docente Presencial
Prerrequisitos
Departamento Ciencias Biomédicas, Medicina e Fisioterapia
Fisioterapia, Medicina e Ciencias Biomédicas
Coordinador/a
Díaz Prado, Silvia María
Correo electrónico
s.diaz1@udc.es
Profesorado
Díaz Prado, Silvia María
Rey Rico, Ana
Correo electrónico
s.diaz1@udc.es
ana.rey.rico@udc.es
Web http://http://www.udc.es/fcs/ga/index.htm
Descripción general Estudo das técnias de manipulación e análise de ácidos núcleicos de uso habitual nos laboratorios de investigación biomédica.

Competencias del título
Código Competencias del título
A1 Capacidad para elegir y aplicar las metodologías de investigación más adecuadas a la investigación planteada.
A2 Capacidad para el diseño experimental y el completo desarrollo de proyectos de investigación en el ámbito sanitario, desde la formulación de la hipótesis de Investigación hasta la comunicación de los resultados.
B1 Capacidad para aplicar el método científico en la planificación y el desarrollo de la investigación sanitaria.
B2 Fluidez y propiedad en la comunicación científica oral y escrita.
B3 Compromiso por la calidad del desarrollo de la actividad investigadora.
B4 Capacidad de análisis y de síntesis.
B5 Habilidad para manejar distintas fuentes de información.
B6 Capacidad para trabajar de forma colaborativa en equipos multi e interdisciplinar.
B7 Capacidad de establecer una relación de empatía con los sujetos implicados en el desarrollo de la actividad investigadora.
C1 Expresarse correctamente, tanto de forma oral como escrita, en las lenguas oficiales de la comunidad autónoma.
C2 Dominar la expresión y la comprensión de forma oral y escrita de un idioma extranjero.
C3 Utilizar las herramientas básicas de las tecnologías de la información y las comunicaciones (TIC) necesarias para el ejercicio de su profesión y para el aprendizaje a lo largo de su vida.
C5 Entender la importancia de la cultura emprendedora y conocer los medios al alcance de las personas emprendedoras.
C6 Valorar críticamente el conocimiento, la tecnología y la información disponible para resolver los problemas con los que deben enfrentarse.
C7 Asumir como profesional y ciudadano la importancia del aprendizaje a lo largo de la vida.
C8 Valorar la importancia que tiene la investigación, la innovación y el desarrollo tecnológico en el avance socioeconómico y cultural de la sociedad.

Resultados de aprendizaje
Resultados de aprendizaje Competencias del título
Conocer diferentes técnicas de aislamiento de ADN y de ARN y, en particular, la técnica de PCR. AI1
AI2
BM1
BM2
BM3
BM4
BM5
BM6
BM7
CM1
CM2
CM3
CM5
CM6
CM7
CM8
Alcanzar una visión amplia de diferentes técnicas empleadas para la detección y análisis de la variabilidad genética y de la mutación. AI1
AI2
BM1
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Conocer el funcionamiento de la PCR a Tiempo Real. AI1
AI2
BM1
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CM3
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Comprensión de la técnica de secuenciación de ADN. AI1
AI2
BM1
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BM6
BM7
CM1
CM2
CM3
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CM6
CM7
CM8
Entender los principios de la técnica de FISH y conocer sus principales aplicaciones. AI1
AI2
BM1
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BM3
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BM6
BM7
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CM3
CM5
CM6
CM7
CM8
Adquirir un conocimiento teórico y práctico de como realizar mutagénesis del ADN. AI1
AI2
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BM3
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Conocer técnicas de manipulación genética y sus aplicaciones en Ingeniería Genética. AI1
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Conocer técnicas empleadas en la generación de los vectores retrovirales y la transducción de células diana. AI1
AI2
BM1
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CM3
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CM7
CM8

Contenidos
Tema Subtema
Tema 1. Los ácidos nucleicos. 1.1. Estructura de los ácidos nucleicos.
1.2. Función de los ácidos nucleicos.
1.3. Aislamiento de los ácidos nucleicos.
1.4. Cuantificación de los ácidos nucleicos.
Tema 2. La Reacción en Cadea de la Polimerasa (PCR). 2.1. Variantes del método de la PCR.
2.2 PCR cuantitativa o en tiempo real (qPCR): cuantificación absoluta y relativa.
2.3. Aplicaciones de la PCR en la investigación médica.
Tema 3. La variabilidad genética. 3.1. Técnicas del análisis de la variabilidad genética: PCR y secuenciación del ADN.
3.2. Variabilidad genética del ADN mitocondrial.
Tema 4. Herramientas bioinformáticas para el análisis de
secuencias de ácidos nucleicos.
4.1. Para el análisis de secuencias codificantes y no codificantes.
4.2. Para la búsqueda de polimorfismos y variabilidad en estudios poblacionales.
4.3. Para el análisis de secuencias repetitivas y su implicación en diversas patologías.
Tema 5. Técnicas de inmunoprecipitación de la cromatina
(ChIP).
5.1. Para la detección de proteínas unidas a secuencias de ADN (ADN-ChIP)
5.2. Para la detección de proteínas unidas a secuencias de ARN (ARN-ChIP)
Tema 6. Introducción a la citogenética molecular. 6.1. Hibridación in-situ fluorescente (FISH).
6.2. Aplicaciones de la citogenética en la investigación: DNA Breakage Detection- FISH (DBD-FISH) y COFISH.
Tema 7. Metodología de la mutagénesis aleatoria y dirigida
del ADN.
7.1. Aplicaciones prácticas de la mutagénesis aleatoria en el laboratorio de investigación.
Tema 8. Ingeniería genética. 8.1. La tecnología del ADN recombinante.
8.2. Métodos de entrega de ADN: transfección y transducción.
8.3. Investigación en animales transgénicos.
8.4. Geración de animales “knockout”.
PRÁCTICAS.
1.- Aislamiento del ARN a partir de un cultivo celular.
2.- Desarrollo de una RT-PCR
3.- Desarrollo de una PCR a tiempo real.
4.- Secuenciación de ADN.
5.- Software de análisis.
6.- Co-immunoprecipitacion.
7.- Estudio citogenético.
8.- Mutaxénese.
9.- Transfección.
10.- Observación de resultados.

PRÁCTICAS (DESARROLLO):
1.- Aislamiento del ARN a partir de un cultivo celular. Cuantificación y análisis del ARN aislado mediante bioanalizador.
2.- Desarrollo de una RT-PCR: preparación de las reacciones y programación del termociclador. Análisis del ADNc obtenido tras la RT-PCR.
3.- Desarrollo de una PCR en tiempo real: preparación de las reacciones y programación del termociclador. Interpretación de los
resultados obtenidos.
4.- Secuenciación de ADN. Visualización y funcionamiento de un secuenciador automático de ADN.
5.- Software de análisis. Empleo de diferentes softwares para el análisis de secuencias de ácidos nucleicos.
6.- Co-immunoprecipitacion e identificación de los complejos proteicos que interaccionan con una determinada proteína.
7.- Estudio citogenético. Preparación de
muestras para estudio citogenético (cariotipo y FISH). Clasificación de
cromosomas en el cariotipo e identificación de anomalías cromosómicas mediante FISH.
8.- Mutagénes. Mutagénese dirigida de dominios o residuos aminoacídicos en genes de interés clínico. Estudios fenotípicos de la selección de mutantes.
9.- Transfección de plásmidos en células eucariotas o procariotas y estudio de las células transfectadas.
10.- Observación de resultados. Observación al microscopio de líneas de empaquetamiento.

Planificación
Metodologías / pruebas Competéncias Horas presenciales Horas no presenciales / trabajo autónomo Horas totales
Lecturas B2 B4 B5 C1 C2 C3 C6 0 50 50
Prácticas de laboratorio A1 A2 B1 B2 B3 B4 B5 B6 B7 C1 C2 C3 C5 C6 C7 C8 28 28 56
Prueba de respuesta múltiple A2 B1 B4 1 0 1
Sesión magistral A1 A2 B1 C5 C6 C8 13 26 39
 
Atención personalizada 4 0 4
 
(*)Los datos que aparecen en la tabla de planificación són de carácter orientativo, considerando la heterogeneidad de los alumnos

Metodologías
Metodologías Descripción
Lecturas Lectura de un artículo científico relevante y relacionado con la materia impartida.
Prácticas de laboratorio Se desarrollan técnicas de uso actual en investigación biomédica, que complementan los conocimientos impartidos en la sesión magistral.
Prueba de respuesta múltiple Examen tipo test, en el que cada pregunta consiste en 4 afirmaciones de las que solo una es correcta.
Sesión magistral Clase teórica participativa, favoreciendo el intercambio de opiniones, el debate y la respuesta de las preguntas formuladas por el alumnado.

Atención personalizada
Metodologías
Lecturas
Prácticas de laboratorio
Sesión magistral
Descripción
Al tratarse de un grupo reducido de alumnos, es posible la resolución de dudas y el seguimiento individualizado durante el mismo proceso de aprendizaje.
En particular, la sesión magistral es participativa, favoreciendo el intercambio de opiniones, el debate y la resposta de las preguntas formuladas.
Las prácticas de laboratorio son tuteladas en todo momento por el profesorado y, si es necesario, por el grupo de investigación en el que se integra el alumno (desde el comienzo de curso, cada alumno se integra en el grupo de investigación en el que va a desarrollar su Trabajo Fin de Máster).

Evaluación
Metodologías Competéncias Descripción Calificación
Prácticas de laboratorio A1 A2 B1 B2 B3 B4 B5 B6 B7 C1 C2 C3 C5 C6 C7 C8 Al tratarse de un grupo reducido de alumnos, es posible un seguimiento personalizado que facilita la evaluación continua. Se tendrá en cuenta la asistencia, la participación activa y el trabajo desarrollado por el/la alumno/a. 50
Prueba de respuesta múltiple A2 B1 B4 Examen tipo test, en el que cada pregunta consiste en 4 afirmaciones de las que solo una es correcta. 50
 
Observaciones evaluación

Para aprobar la materia, hay que obtener globalmente un mínimo de 5 sobre 10 y, en cada metodología evaluada, un mínimo de 2,5 sobre 5.


Fuentes de información
Básica

Bibliografía Básica:

1.- Kristin Edwards, Julie Logan and Nick Saunders. Real Time PCR: An essential guide. Genomics Proteomics and Bioinformatics Unit, Health Protection Agency, London. Horizon Bioscience (2004).

2.- Griffiths, Miller, Suzuki, Lewontin & Gelbart. Genética (7ª edición). Editorial McGraw-Hill (2001).

3.- Sambrook J et al. Molecular Cloning: A Laboratory Manual, second ed. Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York (1989).

Complementária

Libros

- Kirstin Edwards, Julie Logan and Nick Saunders.Real Time PCR: An essential guide. Genomics Proteomics and Bioinformatics Unit, Health Protection Agency, London. Horizon Bioscience (2004).

- Rautenstrauss B, Liehr T. FISH Technology. Springer Lab Manual. Springer, Berlin (2002).

Artigos

- Bustin SA, Nolan T. Pitfalls of quantitative real-time reverse transcription polymerase chain reaction. Journal of Biomolecular Techniques 2004; 15:155-66.

- Bustin SA. Quantification of mRNA using real-time reverse transcription PCR: trends and problems. J Mol Endocrinnol 2002; 29: 23-9.

- Chen G, Sun H, Yang H, Kubelik D, Garcia B, Luo Y, Xiang Y, Qian A, Copeman L, Liu W, Cardella CJ, Wang W, Xiong Y, Wall W, White DJ, Zhong R. The role of anti-non-Gal antibodies in the development of acute humoral xenograft rejection of hDAF transgenic porcine kidneys in baboons receiving anti-Gal antibody neutralization therapy. Transplantation 2006; 81:273-83.

- Dinnyes A, Szmolenszky A. Animal cloning by nuclear transfer: state-of-the-art and future perspectives. 2005; 52:585-8.

- Helfand MS, Bethel CR, Hujer AM, Hujer KM, Anderson VE, Bonomo RA. Understanding resistance to beta-lactams and beta-lactamase inhibitors in the SHV beta-lactamase: lessons from the mutagenesis of SER-130. J Biol Chem 2003; 278:52724-9.

- Kay MA, Glorioso JC, Naldini L. Viral vectors for gene therapy: the art of turning infectious agents into vehicles of therapeutics. Nat Med 2001; 7:33-40.

- Nelson JD, Denisenko O, Bomsztyk K. Protocol for the fast chromatin immunoprecipitation (ChIP) method. Nature protocols 2006; 1:179-85.

- Rego I, Fernández-Moreno M, Fernández-López C, Gómez-Reino JJ, González A, Arenas J, Blanco FJ. Role of European mitocondrial DNA haplogroups in the prevalence of hip osteoarthritis in Galicia, Northern Spain. Ann Rheum Dis. 2010; 69:210-3.

Páxinas web

- DNA sequencing Tutorials: http://bioweb.uwlax.edu/GenWeb/Molecular/Theory/DNA_sequencing/dna_sequencing.htm

- Human Molecular Genetics 2. Tom Strachan; Ed. John Wiley & Sons. A texto completo en http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=books

- Universal Probe Library de Roche Applied Science: http://www.universalprobelibrary.com


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Programa Green Campus FCS

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a. Se solicitarán mayoritariamente en formato virtual y soporte informático.

b. De realizarse en papel:

- No se utilizarán plásticos.

- Se realizarán impresiones a doble cara.

- Se utilizará papel reciclado.

- Se evitará la realización de borradores.

PLAGio

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Dicha circunstancia se comunicará a la Comisión Académica y al resto de profesores del título. En caso de que se reitere la irregularidad en una 2ª evaluación, la Comisión podrá solicitar al Rector la expulsión temporal o definitiva del/de la alumno/a del título cursado.



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